Immunofluorescent protein detection in Western blotting

Authors

دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران

Abstract

This report describes the detailed procedures for Western blot analysis using fluorescent antibodies. After electrophoresis and subsequent electroblotting, the fluorescent-labeled antibodies were visible upon ultraviolet illumination of the polyvinylidene fluoride (PVDF) membranes and could then be photographed to give an accurate record of the blots. Fluorescent labeling allows for photographic records of the blot without the need for subsequent staining steps. In an effort to evaluate this method in the study of immunogenic antigens, this study describes a study on BLV (Bovine Leukemia Virus) tumor antigens. The fluorescent labeling of antibodies for detection by immunoblotting was found to be a very sensitive and reliable alternative to the conventional methods of Western blots.

Article Title [فارسی]

ردیابی پروتئین ها در وسترن بلات با روش ایمونوفلئورسنس

Authors [فارسی]

  • غلامرضا نیک بخت بروجنی
  • مهدی امام
Abstract [فارسی]

روش ردیابی باندهای پروتئینی پس از وسترن بلات با استفاده از پادتن های نشاندارشده با فلئورسنت در این مطالعه به تفضیل شرح داده شده است. با استفاده از پادتن های نشاندارشده با فلئورسنت، می توان پروتئین هایی را که پس از الکتروفورز به غشاء پلی وینیلیدن فلوراید(PVDF) منتقل شدند را در پرتو اشعه ماوراء بنفش آشکار کرده و تصویر آن را به دقت ثبت نمود. نشان گذاری فلئورسنت بدون نیاز به مراحل اضافی جهت رنگ آمیزی، امکان ثبت تصاویر دقیق را فراهم می کند. برای ارزیابی این روش، پادگن های توموری لکوزانزئوتیک گاوی به عنوان مثالی از پروتئین های ایمونوژنیک مورد بررسی قرار گرفت. نتایج این بررسی مشخص کرد که، نشان گذاری پادتن ها با فلئورسنت جهت ردیابی پروتئین ها یک روش جایگزین بسیار حساس و قابل اطمینان نسبت به روش های متداول بررسی پروتئین ها در وسترن بلات است.