Isolation and identification of Betanodavirus causing mass mortalities in golden grey mullet (Liza auratus) in the Caspian Sea

Authors

Abstract

Outbreaks causing mass mortalities have been observed in the golden grey mullet (Liza auratus) population in southern coastal area of the Caspian Sea since 2002. The clinical signs include neurological abnormalities, such as erratic swimming behavior, spiral swimming, belly-up at rest and over inflation of the swim bladder. Three hundred and twelve samples of moribund fish with sizes that ranged from 15-26 cm showing abdominal enlargement were collected from 2006-2008. No pathogenic bacteria and parasite were found. The observed histopathological changes in 29 fish were necrosis and vacuolation of the brain, optic nerve and retina. Cytopathological effects of nodavirus characterized by vacuolation were observed in the SSN-1 cell line at 25?C, 5 d after inoculation with the filtered supernatant of the brain and eye of four affected fish. The recovered virus from cell line exhibited 104 TCID50 per mL when titrated. Indirect immunoflorescent antibody test showed nodavirus antigens in the retina and positive-CPE SSN-1 cells. Also, a RT-PCR product of approximately 289 bp was amplified from the brain and retina of the 23 samples, including the SSN-1 positive samples. This is the first report of the isolation and characterization of nodavirus from golden grey mullet from the Caspian Sea and, therefore, possible infections in other valuable species of the Caspian Sea warrant further studies.

Keywords


Article Title [فارسی]

جداسازی و شناسایی بتا نوداویروس عامل تلفات در کفال ماهیان طلایی دریای خزر

Authors [فارسی]

  • مهدی سلطانی
  • محدث قاسمی
  • مصطفی شریف روحانی
  • عیسی شریف پور
  • سید جلال ذریه زهرا
Abstract [فارسی]

در پی وقوع تلفات شدید در کفال ماهیان طلایی در سواحل جنوبی دریای خزر که از سال 1380 آغاز گردید تعداد 312 ماهی بیمار در اندازه 15 تا 25 سانتی متر دارای علایم بالینی شامل اختلالات عصبی مانند رفتار شنای نامنظم، مارپیچی یا خوابیده به پشت در سطح آب و اتساع محوطه شکمی طی سالهای 1385 تا 1388 نمونه برداری گردید. تمامی ماهیان بیمار دارای کیسه شنای متسع بودند. در آزمایشات باکتریای شناسی و انگل شناسی، هیچگونه عامل بیماریزا را مشخص نگردید. مطالعه بافت شناسی در 29 ماهی، علایم نکروز و واکئوله شدن بافت مغز، اعصاب بینایی و شبکیه چشم را نشان داد. آثار آسیب سلولی( CPE ) حاصل از نوداویروس در تیره سلولی SSN-1، 5 روز پس از تلقیح هموژن فیلتر شده مغز و چشم 4 ماهی در ماهی در دمای 25 درجه سانتی گراد به صورت واکوئوله شدن شدید مشاهده شد. این آثار آسیب سلولی در پاساژهای بعدی نیز ایجاد گردید. عیار ویروس مذکور 4 10 TCID50 در میلی لیتر محاسبه شد. در آزمایش آنتی بادی درخشان غیر مستقیم با استفاده از آنتی بادی مونوکلونال ضد نوداویروس، نقاط طلایی درخشان در سلولهای SSN-1 آلوده شده و مقاطع بافتی چشم و مغز نشان از نشان از حضور آنتی ژن نوداویروسی بود. تشکیل باند bp 289 در الکتروفورز محصول RT-PCR حاصل از 23 نمونه چشم و مغز و سلولهای SSN-1 آلوده شده، حاکی از حضور RNA نوداویروس در آنها بود. در بررسی میکروسکوپ الکترونی، ذرات نوداویروس با اندازه 25 تا 30 نانومتر در مقطع چشم یک ماهی کفال بیمار مشاهده گردید. این اولین گزارش جداسازی و شناسایی نوداویروس از کفال طلایی دریای خزر است ولی بررسی احتمال ابتلای سایر گونه ها به این بیماری نیاز به مطالعات بیشتری دارد.