Detection of the “Tim” gene of sheep Giardia using “Tim” Gene primers of Giardia with human origin

Authors

Abstract

Giardiasis is an important human parasitic disease. Giardia is a genus composed of binuclear flagellate protozoa. Giardia duodenalis is a parasitic species for a wide range of vertebrates, including humans. Heterogeneity in G. duodenalis has been shown by serological, biochemical, and molecular analysis. In the present study, the possible genetic similarity between Giardia in sheep and humansand their probable zoonosis was investigated. Direct examination and formalin ether concentration technique were performed on the contents and tissues of sheep intestines. The gradient sucrose method was applied to collect and purify cysts, and DNA extraction was performed by the phenol-chloroform method. Only very small amounts of DNA could be extracted after repeated freezing, thawing and suspension with lysis buffer, after which polymerase chain reaction (PCR) was performed for DNA amplification by primers that were designed for Giardia of human origin. The gene, "triose phosphate isomerase" (tim or tpi), was selected as the molecular marker and two sets of primers (PM290, PM924) were used. We examined 308 sheep stool samples in our study, including 21 positive samples. Cultures for Giardia were negative. Three sheep isolates were determined by a 290 base pair (bp) amplicon that were similar to certain human types. The similarity of the sheep and human genomic characters of Giardia implies the possibility that there is transmission of these protozoa between humans and sheep.

Article Title [فارسی]

تشخیص ژن " tim" ژیاردیای گوسفند با استفاده از پرایمرهای ژن " tim" ژیاردیا با منشأ انسانی

Authors [فارسی]

  • میترا زارع بورانی
  • فاطمه میرهادی
  • مصطفی زضائیان
  • نسرین دشتی
Abstract [فارسی]

ژیاریازیس بیماری مهم انگلی انسان است.ژیاردیا تک یاخته تاژک دار دو هسته ای است.اسپس ژیاردیا دئودنالیس انگل طیف
گسترده ای از مهره داران از جمله انسان می باشد.تنوع ژنتیکی در ژیاردیا دئودنالیس توسط آنالیزهای سرولوژیک ،
بیوشیمیایی و مولکولی نشان داده شده است. در مطالعه حاضر ، احتمال تشابهات ژنتیکی بین ژیاردیای گوسفندی و انسانی و
احتمال زئونوز بودن مورد بررسی قرار گرفت.آزمایش مستقیم و تکنیک تغلیظ به روش فرمل- اتر بر روی محتویات بافتی و
روده ای گوسفند انجام شد. روش گرادیان سوکروز برای جمع آوری و تخلیص کیست ها استفاده گردیدواستخراج DNA با
روش فرمل-اتر انجام گرفت.مقادیر بسیار کمی ازDNA پس از چندین بار ذوب و انجماد و تعلیق بدست آمد.سپس واکنش
زنجیره ای پلیمراز(PCR) برای تکثیر DNA با پرایمرهایی که برای ژیاردیا با منشأ انسانی طراحی شده بود، انجام شد
.ژن ?تریوز فسفات ایزومراز?(tim یا tpi ) بعنوان مارکر مولکولی انتخاب و دو پرایمر(290PM و 924PM) مورد
استفاده قرار گرفتند. در این بررسی 308 نمونه مدفوع گوسفند بررسی شد.تعداد 21 نمونه از نظر ژیاردیا مثبت گردیدند.3
ایزوله گوسفند با پرایمر290PM تکثیر و با آمپلیکون bp290 که مشابه با نوع انسانی است مشخص گردید ند.تشابه ژنی
ژیاردیای گوسفند با نوع انسانی، احتمال انتقال این تک یاخته بین انسان و گوسفند را نشان می دهد.