Isolation and identification of Campylobacter jejuni from poultry carcasses using conventional culture methods and multiplex PCR assay

Authors

1 دانشکده دامپزشکی؛ دانشگاه فردوسی مشهد

2 دانشکده دامپزشکی دانشگاه فردوسی مشهد

Abstract

Campylobacter jejuni is a major cause of food-borne diarrhea in many countries. Poultry and poultry products are known as important sources of human campylobacteriosis. In this study, conventional culture and multiplex PCR methods were compared for the detection of C. jejuni isolated from poultry carcasses. A total of 100 samples, representing 20 broiler flocks, were collected from poultry carcasses after the evisceration stage in the processing line at a commercial broiler slaughtering facility in Mashhad, Iran. In the conventional culture method, samples were processed by enrichment followed by selective plating, and then suspected colonies were isolated on sheep blood agar and tested for morphology, motility, Gram staining, biochemical properties and hippurate hydrolysis activity. For the identification of the Campylobacter genus and its jejuni serovar by molecular methods, a multiplex PCR assay (m-PCR) with two sets of specific primers was used. In the hippurate hydrolysis test of suspected colonies, 76% of the samples were determined as positive, while in the m-PCR assay 28% of cultures harvested were identified as C. jejuni. Two percent of hippurate hydrolyze negative colonies were found positive in the m-PCR test.
It appears that the conventional method, based on the hippurate hydrolysis test for detection of C. jejuni, is a less reliable test. The use of the m-PCR method, based on amplification from conserved genes, allows reliable detection and identification of C. jejuni.

Article Title [فارسی]

مقایسه کاربرد دو روش کشت مرسوم و مولتی پلکس PCR در شناسائی باکتری کمپیلوباکتر ججونای جداسازی شده از لاشه طیور در مشهد

Authors [فارسی]

  • Abbas Ali Sari 1
  • عبدالله جمشیدی 2
  • محمدرضا باسامی 2
Abstract [فارسی]

باکتری کمپیلوباکتر ججونای یکی از عوامل اصلی گاستروآنتریت ناشی از مصرف مواد غذائی آلوده می باشد. طیور و محصولات آن نقش مهمی را درانتقال بیماری کمپیلو باکتریوزیس به انسان دارا می باشند. در این مطالعه جهت مقایسه دو روش کشت مرسوم و مولتی پلکس PCR در شناسائی باکتری کمپیلو باکتر ججونای که از لاشه طیور پس از مرحله تخلیه امعا و احشا در کشتارگاه صنعتی مشهد جداسازی گردیده بود، یکصد لاشه طیور از 20 گله گوشتی با استفاده از روش rinse test مورد نمونه برداری قرار گرفت. نمونه ها ابتدا در محیط براث غنی سازی گردید و سپس در محیط آگار انتخابی کشت داده شد. کلنی های مشکوک در آگار خوندار گوسفندی جداسازی گردید و از نظر شکل باکتری، حرکت، تستهای بیوشیمیائی و رنگ آمیزی گرم و نیز تست هیدرولیز هیپورات مورد آزمایش قرار گرفت. جهت مقایسه تست مولتی پلکس PCR از کلنی های مشکوک با استفاده از دو جفت پرایمر جهت تشخیص جنس کمپیلو باکتر و گونه ججونای انجام گردید. در این مطالعه با استفاده از روش کشت مرسوم میزان آلودگی لاشه های طیور 76% و در استفاده از روش مولتی پلکس PCR 28% تعیین گردید. میزان 2% از نمونه ها که در آزمایش کشت مرسوم از نظر تست هیدرولیز هیپورات منفی بودند، در تست مولتی پلکس PCR مثبت تشخیص داده شد. به نظر می رسد نتایج روش کشت مرسوم که شناسائی باکتری کمپیلو باکتر ججونای بر اساس تست هیدرولیز هیپورات صورت می گیرد قابل اطمینان نمی باشد و استفاده از روش مولتی پلکسPCR که قطعه ژن اختصاصی را از گونه باکتری کمپیلو باکتر ججونای تکثیر می نماید توصیه می گردد.