Semiquantitative RT-PCR analysis to assess the expression levels of iNOS in chicken macrophages

Document Type: Genetic and Toxicology

Authors

Abstract

Abstract: iNOS is inducible by a variety of factors related to inflammation and referred to as inducible NOS(iNOS). It is regulated at the level of gene expression; once expressed, it produces NO at a high rate. iNOS gene-expression profiling is an important tool in understanding molecular markers of the responses of cells and tissues to external factors. In this article a semiquantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) protocol was optimized to extract RNA (ribonucleic acid) from chicken spleen and to measure the expression levels of iNOS mRNAs from each sample. Detailed procedure was described for the analysis of iNOS levels. b-actin was used as an internal control to normalize for sample to sample variations in total RNA amounts and for reaction efficiency. Co-amplification of the iNOS gene with housekeeping gene (b-actin) provides a quantitative result. Changes in gene expression level may be monitored, while avoiding sample-to-sample loading variation.

Key words: iNOS mRNA, RT-PCR, gene expression, b-actin.

Keywords


Article Title [Persian]

آنالیز نیمه کمی جهت ارزیابی بیان ژن iNOS در ماکروفاژهای طیور

Authors [Persian]

  • غلامرضا نیکبخت بروجنی
  • مسعود تشفام
  • حسین حسن پور
Abstract [Persian]

‌چکیده
iNOS براثر عوامل مختلف التهابی بیان می‌گردد و به همین دلیل نوع القایی NOS نامیده می شود. تنظیم بیان آن در سطح ژن صورت گرفته و میزان بیان آن ارتباط مستیقیمی با تولید بالای NO دارد. بررسی بیان iNOS ابزار قدرتمندی برای درک شاخص‌های ملکولی موثر در پاسخ‌هایبافتی و سلولی به عوامل خارجی است. دراین تحقیق روش نیمه کمی واکنش RT-PCR برای استخراج RNA طحال طیور و اندازه‌گیری بیانiNOS mRNA در هر نمونه طراحی شد. جزئیات روش برای آنالیز میزان بیان ژن شرح داده شده است.b-actin به عنوان کنترل داخلی برای عادی سازی تغییرات میزان RNA تام در بین نمونه‌ها و کارآیی واکنش استفاده شد. افزوده‌سازی همزمان ژن‌های iNOS و ژن‌های کنترل داخلی )b-actin( نتایج کمی را به دست می‌دهد که امکان اندازه گیری تغییرات در میزان بیان ژن را فراهم می ‌سازد، بی آن که اختلافات مقدار یک نمونه با نمونه دیگر برآن تاثیر بگذارد. ‌
واژه‌های کلیدی:iNOS mRNA، RT-PCR، بیان ژن،| .b-actin

Keywords [Persian]

  • بیان ژن