Isolation of bovine spermatogonial cells and co-culture with prepubertal sertoli cells in the presence of colony stimulating factor-1

Authors

1 Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran

2 Department of Anatomy, Faculty of Medical Sciences, University of Tarbiat Modares, Tehran, Iran

3 Department of Animal Sciences, Faculty of Agriculture, University of Tabriz, Tabriz, Iran

Abstract

BACKGROUND: Spermatogonial stem cells (SSCs) are infrequent
self-renewing cells among the type A spermatogonia
within the seminiferous tubules and are the basis of spermatogenesis
in mammalian testis. An adequate number of SSCs is a
primary requirement for the study of their behavior, regulation, and
further biomanipulation. OBJECTIVES: In this paper, we studied
the development of the primary co-cultures of type A spermatogonia
and prepubertal bovine sertoli cells in the presence of Colony
Stimulating Factor 1 (CSF1), a potential contributor in the SSC
niche. METHODS: The effect of different concentrations of CSF1
(0, 10, 50 and 100 ng/mL) on the colonization activity of spermatogonial
cells was assessed 4, 7 and 11 days after the beginning of the
culture by counting the total number of colonies and measuring their
area in each group of the present experiment. Immunofluorescent
staining against OCT4 and vimentin led to the confirmation of the
nature of both the SSCs and sertoli cells. RESULTS: Results showed
that the total number of colonies from day 4 to 11 increased
significantly in all groups, independent of CSF1 concentration. In
addition, the total number and total area of colonies were higher (not
significant) in 10 and 50 ng/mL CSF1 treatments than the control
and 100 ng/mL CSF1 groups in all the three evaluations during the
experiment. However, this difference was only significant (p<0.05)
between the total area of colonies in the control and 10 ng/mLCSF1
groups at day 4 of co-culture. CONCLUSIONS:It was concluded that
CSF1 can be a suitable growth factor for improving SSCs colonization
in vitro, particularly during the first days of culture where
accompanying sertoli cells still have not proliferated sufficiently to
support the propagating spermatogonial cells.

Keywords


Article Title [فارسی]

جداسازی سلولهای اسپرماتوگونی از بیضه گوساله نابالغ و همکشتی با سلولهای سرتولی در محیط کشت حاوی CSF1

Authors [فارسی]

  • شیوا شفیعی 1
  • پرویز تاجیک 1
  • حمید قاسم زاده نوا 1
  • منصوره موحدین 2
  • مسعود طالب خان گروسی 1
  • بابک قاسمی پناهی 3
  • پیمان رحیمی فیلی 1
1 دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، دانشجوی دکتری تحصصی مامایی و بیماریهای تولید مثل دام
2 دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده علوم پزشکی، استاد گروه علوم تشریح، دکتری
3 دانشکده کشاورزی، دانشگاه تبریز، استادیار گروه علوم دامی، دکتری تخصصی
Abstract [فارسی]

زمینه مطالعه: سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی (SSCs) گروه کوچکی از سلولهای اسپرماتوگونی نوع A هستند که می توانند سلولهایی کاملاً مشابه خود ایجاد نموده (خودسازی) و همچنین تمایز یابند و در پایان روند اسپرماتوژنز، اسپرم را تولید نمایند. فرآیند خودسازی SSCs به طور کامل شناخته نشده است. برای فراهم شدن امکان مطالعه خصوصیات و عملکرد این سلولها که منجر به خودسازی و تمایز آنها می گردد، دسترسی به تعداد کافی از آنها ضروری است. هدف: در این مطالعه اثر دوزهای مختلف CSF1 روی کلونیزاسیون SSCs در همکشتی با سلولهای سرتولی بررسی شد. CSF1 از عواملی است که پیشنهاد شده ممکن است در SSC niche (جایگاه قرارگیری SSCs در لوله های سمینیفروس) که در آن خودسازی به تمایز برتری دارد، نقش داشته باشد. روش کار: تعداد و مساحت کلونی های اسپرماتوگونی ایجاد شده در حضور دوزهای متفاوت CSF1 (0، 10، 50 و 100 ng/ml) طی روزهای 4، 7 و 11 کشت ارزیابی گردید. توسط رنگ آمیزی ایمیونوسیتوفلورسنت علیه مارکرهای OCT4 و vimentin ماهیت SSCs و سلولهای سرتولی تاٌیید شد. نتایج: تعداد کلونی ها از روز 4 تا روز 11 در تمامی گروهها مستقل از حضور و یا دوز CSF1 به شکل معنی داری افزایش نشان داد. مشاهده گردید که تعداد کل کلونی ها و مجموع مساحت آنها در گروههای SCF1 10 و 50 ng/ml نسبت به گروههای CSF1 100 و 0 (کنترل) بالاتر است اما این تقاوت تنها در مورد مقایسه مجموع مساحت کلونی ها بین گروه CSF1 10 ng/ml و کنترل و تنها در روز 4 معنی دار بود (p

Keywords [فارسی]

  • سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی
  • همکشتی
  • CSF1
  • اسپرماتوگونی گاو