Development of antibody-based microarray assay for quantitative detection of aflatoxin B1

Authors

Department of Food Hygiene and Quality Control, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran,

Abstract

BACKGROUND: Aflatoxin B1 (AFB1) is a toxic metabolite
produced by Aspergillus species that contaminates a wide range of
agricultural products. OBJECTIVES: This study was designed to
develop a rapid and highly sensitive immunoassay method in
microarray format for quantitative detection of AFB1 to evaluate
the potential of microarray platform for high-throughput screening,
which can be beneficial in food and feed industry. METHODS:
Following successful optimization, using an indirect competitive
immunoassay in dot blot format, AFB1-bovine serum albumin
(AFB1-BSA) conjugate was contact-printed onto 16 isolated subarrays
on multi-pad nitrocellulose coated slides; subsequently used
in competitive binding assays. RESULTS: Using the aforementioned
assay, AFB1 was determined from 15 pg/g to 3.04 ng/g working
range with detection limit (LOD) of 1 pg/g. To evaluate assay
performance in real food matrices, the authors spiked wheat
samples with different concentration of AFB1. After extraction,
working ranges of 0.11-4.15 ng/g with detection limit of 30pg/g was
determined. Good recoveries (94±9%) were obtained, demonstrating
accurate detection of AFB1 concentrations in wheat samples.
Assay procedure completed in 3 hours. CONCLUSIONS: The results
indicated that the proposed developed assay in microarray format
could be used for rapid and sensitive detection of AFB1in wheat
samples.

Keywords


Article Title [فارسی]

توسعه سنجش ریزآرایه‌ای آنتی بادی برای تشخیص کمی آفلاتوکسین1B

Authors [فارسی]

  • آزاده بیضایی
  • ابوالفضل کامکار
  • علی میثاقی
گروه بهداشت و کنترل کیفی مواد غذایی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران، ایران
Abstract [فارسی]

زمینه مطالعه:  آفلاتوکسین ‌1B‌ یک متابولیت بسیار سمی است که توسط گونه های آسپرژیلوس تولید گردیده و طیف وسیعی از محصولات کشاورزی را آلوده می کند. هدف: هدف از این مطاله توسعه یک روش ایمونو اسی سریع و حساس در فرمت ریزآرایه ای به منظور اندازه گیری کمی آفلاتوکسین ‌1B‌ ، در جهت ارزیابی کارایی این روش به منظور توسعه روش‌های غربالگری با کارایی بالا برای استفاده در صنایع مواد غذایی انسانی و دامی بوده است. روش کار:  به دنبال بهینه سازی سنجش با استفاده از تکنیک دات بلات و روش ایمونواسی رقابتی غیرمستقیم،  غلظت بهینه از آفلاتوکسین متصل شده به آلبومین سرم گاوی بر روی 16ساب اری بر روی اسلایده‌های پوشیده شده با نیتروسلولوز پرینت گـردیـده و سنجـش ایمـونـواسی رقابتی اعمال گردید. نتایج: با استفاده از این روش، سنجش آفلاتوکسین در طیف کاری برابر pg/g‌15 تا ng/g04/3 با حد تشخیص pg/g1 تعیین گردید. به منظور ارزیابی کارایی این میکرواری تولید شده در مواد غذایی، آرد گندم به صورت مصنوعی با مقادیر مختلف توکسین آلوده گردید و پس از استخراج، طیف کاری برابر ng/g11/0-15/4 با حد تشخیصی برابر pg/g30 در آرد گندم حاصل گردید. میانگین تخمین بازیافت 9%±94تعیین گردید که نشان دهنده صحت سنجش با استفاده از این روش می‌باشد. این سنجش در مدت زمان3 ساعت تکمیل گردید. نتیجه گیری نهایی: این روش سنجش مطرح شده در فرمت ریزآرایه‌ای می‌تواند به عنوان روش اندازه‌گیری سریع با حساسیت بالا برای سنجش دقیق آفلاتوکسین ‌1B‌ در نمونه‌های گندم به کار رود.
 

Keywords [فارسی]

  • آفلاتوکسین ‌1B‌
  • دات بلات
  • ایمونواسی
  • ریزآر
  • بهینه سازی اولیه