Construction of a recombinant vector for site-directed mutagenesis in Salmonella typhimurium

Authors

1 Department of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran

2 Bacis and Molecular Epidemiology of Gastrointestinal Disorders Research Center, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran

Abstract

BACKGROUND: Among all common techniques in sitedirected
mutagenesis, λ Red recombinase system has been
widely used to knock out chromosomal genes in bacteria. In this
method, there is always the risk of DNA Linear digestion by
host's restriction enzymes that leads to the low frequency of
recombination. OBJECTIVES:To overcome this, we constructed
a recombinant vector to disrupt phoP gene in Salmonella
typhimurium. METHODS: The SOEing PCR method and
restriction enzymes were used to construct the vector. RESULTS:
The resulting plasmid, pTAAZ92, contains a Kanamycin
cassette with two long homologous arms flanking of the phoP
gene. CONCLUSIONS: After electrotransformation of the
pTAAZ92 into the Salmonella typhimurium , the phoP gene is
replaced by the Kanamycin cassette through homologous
recombination. According to the high homology of the phoP
gene in many of Salmonella species the pTAAZ92 can be used to
disrupt the phoP gene in most of these species.

Keywords


Article Title [فارسی]

ساخت وکتور نوترکیب برای ایجاد جهش هدفمند در سالمونلا تیفی موریوم

Authors [فارسی]

  • آنیا آهنی آذری 1
  • تقی زهرایی صالحی 1
  • بهار نیری فسایی 1
  • امید مددگار 1
  • مسعود آل بویه 2
1 دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران- بخش میکروبیولوژی
2 مرکز تحقیقات بیماری های گوارشی دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی- بخش اپیدمیولوژی مولکولی
Abstract [فارسی]

دربین همه تکنیک های رایج برای جهش زایی هدفمند سیستم λ Red recombinase به طور گسترده ای برای غیرفعال کردن ژن های کروموزومی در باکتری ها استفاده شده است. در این روش همیشه خطر تجزیهDNA خطی وارد شده توسط آنزیم های محدود الاثر وجود دارد که سبب کاهش فرکانس نوترکیبی می شود. برای رفع این مشکل ما یک وکتور نوترکیب برای غیرفعال کردن ژن phoP در سالمونلا تیفی موریوم ساختیم. به منظور ساخت این وکتور از SOEing PCR و آنزیم های محدودالاثر استفاده شد. پلاسمید حاصل،pTAAZ92، حاوی یک کاست کانامایسین با دو بازوی طویل هومولوگ مجاور ژنphoP می باشد. با الکتروپوریشن pTAAZ92 به سالمونلا تیفی موریوم کاست کانامایسین از طریق نوترکیبی همولوگ جایگزین ژن phoP می شود. با توجه به هومولوژی زیاد ژن phoP در بسیاری از گونه های سالمونلا می توان از این پلاسمید برای حذف ژن phoP در اکثر این گونه ها استفاده نمود.

Keywords [فارسی]

  • سالمونلا تیفی موریوم
  • اختلال در ژن
  • جهش زایی هدفمند
  • کاست کانامایسین