تشخیص و شناسایی وولباشیا پایپینتیس درعفونت مخفی دیروفیلاریازیس با استفاده از روش HRM Real-time PCR در سگ های بی صاحب استان های گیلان، مازندران وقزوین

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 گروه انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

2 آزمایشگاه رفرانس، دکتر رستگار ، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

10.22059/ijvm.2023.361684.1005415

چکیده

چکیده: زمینه مطالعه: بررسی آلودگی های‌انگلی سگ های ولگرد با توجه به اهمیت بیماری های مشترک قابل انتقال از سگ به انسان حائز اهمیت فراوان است و می تواند تهدیدی برای بهداشت جامعه باشد. ایران یکی از مناطق بومی دیروفیلاریا ایمیتیس است. تست Knott اصلاح شده رایج ترین آزمایش برای تشخیص فیلاریازیس است که اساس آن مشاهده و شناسایی میکروفیلرها در نمونه‌های خون است، اما نتایج این آزمایش در موارد عفونت مخفی بطورکاذب منفی می‌شود. وولباشیا پایپینتیس بعنوان همزیست اجباری دیروفیلاریا ایمیتیس ، نشان دهنده دیروفیلاریازیس درخون سگ است. هدف: مطالعه حاضربا هدف بررسی عفونت مخفی دیروفیلاریا ایمیتیس در سگ های ولگرد استان های گیلان، قزوین و مازندران بر اساس ردیابی دنای وولباشیا پایپینتیس با استفاده از روش ذوب با وضوح بالا (HRM) Real-Time PCR انجام شد. روش کار: تعداد 138 نمونه خون از سگ‌های ولگرد در استان‌های گیلان، مازندران و قزوین جمع‌آوری شد که با دو روش نات اصلاح شده و مولکولی مورد ارزیابی قرار گرفتند. حضور وولباشیا پایپینتیس با تکثیر بخشی از ژن ftsz بطول 267جفت باز بررسی شد. نتایج: نتایج این مطالعه نشان داد که 17.4 درصد از نمونه ها با روش نات اصلاح شده مثبت و 47.8 درصد از نمونه ها با روش مولکولی از نظر آلودگی مثبت بودند. نتایج HRM Real-time PCR نشان داد که دمای ذوب توالی های تکثیر شده ژن سیتوکروم اکسیداز یک برای دیروفیلاریا ایمیتیس (03/0±67/76 درجه سانتیگراد) و آکانتوکیلونما رکوندیتوم (05/0±38/81 درجه سانتی گراد) حاصل شد، دمای ذوب توالی های تکثیر شده ژن ftsz وولباشیا پایپینتیس (80.30°C±0.04°C) بدست آمد که براین اساس روش قابلیت تشخیص تفریقی عفونت را داردو تفاوت در میانگین دماهای ذوب از نظر آماری معنی‌دار بود(05/0p<)، تغییرات دمای ذوب بر اساس تفاوت در توالی‌های نوکلئوتیدها است. نتیجه گیری نهایی: لازم است این نکته مورد توجه قرارگیرد که استفاده از روش های مولکولی برای تشخیص دقیق عفونت مخفی دیروفیلاریازیس ضروری است. آنالیز HRM Real-Time PCR یک مرحله ساده پس ازواکنش زنجیره ای پلیمراز است که از ویژگی های حرارتی قطعات تکثیر شده، برای تشخیص عفونت دیروفیلاریازیس دیروفیلاریازیس بر اساس ردیابی دنای وولباشیا پایپینتیس استفاده می کند.

کلیدواژه‌ها