شناسایی جدایه های کلستریدیوم پرفرنجنس واجد ژن آنتروتوکسین در بین تیپ های توکسینی مختلف از ایران

نوع مقاله : عوامل عفونی - بیماریها

نویسندگان

1 موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی

2 آزمایشگاه مرکزی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران

3 دانشگاه پیام نور واحد تهران، تهران، ایران

چکیده

 
زمینه مطالعه: کلستریدیوم پرفرنجنس به عنوان میکروارگانیسم بیماریزا با انتشار وسیع شناخته شده است. این باکتری در انسان و حیوانات بیماریزایی بسیار مهمی دارد. در یک طبقه بندی کلاسیک کلستریدیوم پرفرنجنس در پنج تیپ توکسینی (از A تا E) بر مبنای ترشح چهار توکسین اصلی (آلفا، بتا، اپسیلون و یوتا) قرار می‌گیرد. آنتروتوکسین به طور معمول در تایپینگ کلستریدیوم پرفرنجنس استفاده نمی‌شود اما یک توکسین کشنده توام با فعالیت نکروتیک محسوب می‌گردد. تاکنون گزارش علمی منتشر شده‌ای در خصوص شناسایی جدایه‌های کلستریدیوم پرفرنجنس از حیوانات در ایران وجود ندارد. هدف: در این تحقیق حضور ‍و فراوانی ژن آنتروتوکسین در بین جدایه‌های کلستریدیوم پرفرنجنس تیپ‌های مختلف مورد بررسی قرار گرفت. روش کار: آزمایش PCR اختصاصی به منظور شناسایی ژن آنتروتوکسین cpe در بین جدایه‌های کلستریدیوم پرفرنجنس جدا شده از مبتلایان به بیماریهای روده‌ای دام‌‌‌ها در ایران استفاده گردید. نتایج: نتایج نشان داد که ژن cpe در جدایه‌های کلستریدیوم پرفرنجنس تیپ‌های A، B، C، D به ترتیب با فراوانی 63% (11/7)، 25% (20/5)، 4/21% (14/3) و 3/53 (15/8) حضور دارد. در مجموع 23 جدایه از 60 جدایه مطالعه شده (3/31%) با PCR از نظر حضور ژن cpe مثبت بودند. نتیجه گیری نهایی:  این اولین گزارش از شناسایی موارد cpe مثبت در بین جدایه‌ای کلستریدیوم پرفرنجنس عامل آنتروتوکسیمی در دام‌ها در ایران می باشد. مطالعات تکمیلی به منظور بررسی میزان تأثیر افزایشی توکسین cpe در پاتوژنز بیماریهای روده‌ای حیوانات پیشنهاد می شود.

کلیدواژه‌ها


Barker, I.K., Van Dreumel, A.A., Palmer, N. (1993) The alimentary system. In: Pathology of Domestic Animals. Jubb, K.V.F., Kennedy, P.C., Palmer, N. (eds.). (4th ed.) Vol 1. San Diego: Academic, USA. p. 425-445.
Bos, J., Smithee, L., McClane, B., Distefano, R.F., Uzal, F., Songer, J.G., Mallonee, S., Crutcher, J.M. (2005) Fatal necrotizing colitis following a food borne outbreak of enterotoxigenic Clostridium perfringens type A infection. Clin Infect Dis. 40: 78-83.
Baums, G., Schotte, U., Amtsberg, G., Goethe, R. (2004) Diagnostie multiplex PCR for toxin genotyping of Clostridium perfringens isolates. Vet Microbiol. 100: 11-16.
Cave, N.J., Marks, S.L., Kass, P.H., Melli, A.C., and Brophy, M.A. (2002) Evaluation of a routine diagnostic fecal panel for dogs with diarrhea. J Am Vet Med Assoc. 221: 52-59.
Deguchi, A., Miyamoto K, Kuwahara T, Miki Y, Kaneko I, Jihong, L.I., Bruce, A., McClane.,   Shigeru, A. (2009) Genetic characterization of type a enterotoxigenic clostridium perfringens strains. PLoS ONE 4: e5598. doi:10.1371/journal.pone.0005598.
Dray, T. (2004) Clostridium perfringens type A and beta 2 toxin associated with enterotoxemia in a 5-week-old goat. Can Vet J. 45: 251-253.
El-Naenaeey, E.Y.M. (2000) Biological detection of Clostridium perfringens enterotoxin originated from camel (Camelus dromedarius) enterotoxaemia. Vet Med J Giza. 48: 73-82.
Jabbari, A.R., Afshari Far, S., Esmaelizad, M., Pilehchian Langroudi, R., Moosawi Shooshtari, M. (2011) Abdolmohammadi Khiav, L. Molecular typing of toxigenic Clostridium perfringens isolated from sheep in Iran. Arch  Razi Inst. 66: 81-86.
John, R., Czeczulin, Philip, C., Hanna, T., Bruce, A., Mcclane. (1993) Cloning, nucleotide sequencing, and expression of the Clostridium perfringens enterotoxin gene in Eschenichia coli. Infect Immun. 61: 3429-3439.
Katahira, J., Sugiyama, H., Inouei, N., Horiguchi, Y., Matsud, M., Sugimoto, N. (1997) Clostridium perfringens enterotoxin utilizes two structurally related membrane proteins as functional receptors in vivo. J Biol Chem. 272: 26652-26658.
Lahti, P., Heikinheimo, A., Johansson, T., Korkeala, H. (2007) Clostridium perfringens type A isolates carrying the plasmid-borne enterotoxin gene (genotypes IS1151-cpe or IS1470-like-cpe) are a common cause of food poisonings. J Clin Microbiol. 46: 371-373.
Li, J., McClane, B.A. (2006) Further comparison of temperature effects on growth and survival of Clostridium perfringens type A isolates carrying a chromosomal or plasmid-borne enterotoxin gene. Appl Environ Microbiol. 72: 4561-4568.
Lisle, J.T., Smith, J.J., Edwards, D.D., McFeters, G.A. (2004) Occurrence of microbial indicators and Clostridium perfringens in wastewater, water column samples, sediments, drinking water, and weddell seal feces collected at McMurdo Station, Antarctica. Appl Environ Microbiol. 70: 7269-7276.
En-N- Manteca, C., Daube, G., Jauniaux, T., linden, A., Pirson, V., Detilleux, J., Ginter, A., Coppe, P., Kaeckenbeeck, A., Mainil, J.G. (2002) A role for the Clostridium perfringens B2 toxin in bovine enterotoxaemia. Vet Microbiol. 86: 191-202.
Miyakawa, M.E.F., Saputo, J., Leger, J.S., Puschner, B., Fisher, D.J., McClane, B.A., Uzal, F.A. (2007) Necrotizing enterocolitis and death in a goat kid associated with enterotoxin (CPE)-producing Clostridium perfringens type A. Can Vet J. 48: 1266-1269.
Marks, S.L., Kather, E.J. (2003) Antimicrobial susceptibilities of canine Clostridium difficile and Clostridium perfringens isolates to commonly utilized antimicrobial drugs. Vet Microbiol. 94: 39-45.
McClane, B.A. (2005) Clostridial enterotoxins. In: Handbook on Clostridia. Durre, P., (ed.). CRC Press. Boca Raton, USA. p. 385-406.
McClane, B.A., Chakrabarti, G. (2004) New insights into the cytotoxic mechanisms of Clostridium perfringens enterotoxin. Anaerobe. 10: 107-114.
McClane, B.A., Rood, J.I. (2001) Clostridial toxins involved in human enteric and histotoxic infection. In: Bahl H, Duerre P (ed).Clostridia: Weinheim: Wiley-VCH, Biotech. Med Appl. p. 169-209.
Melville, S., Collie, R., McClane, B.A. (1997) Regulation of enterotoxin production in Clostridium perfringens. In: The Clostridia: Molecular biology and pathogenesis. Academic Press, London, UK. p. 471-490.
Melville, S., Labbe, R., Sonenshein, A. (1994) Expression from the Clostridium perfringens cpe promoter in C. perfringens and Bacillus subtilis. Infect Immun. 62: 5550-5558.
Miki, Y., Miyamoto, K., Kaneko-Hirano, I., Fujiuchi, K., Akimoto, S. (2008) Prevalence
and characterization of enterotoxin gene carrying Clostridium perfringens from retail meat products in Japan. Appl Environ Microbiol. 74: 5366-5372.
Miyamoto, K., Wen, Q., McClane, B.A. (2004) Multiplex PCR genotyping assey that distinguishes between isolates of Clostridium perfringens type A carrying a chromosonal enterotoxin gene (cpe) locus,a plasmid cpe locus with an IS1470-Like sequence,or a plasmid cpe locus with an IS1151 sequence. J Clin Microbiol. 42: 1552-1558.
Sarker, M.R., Shivers, R.P., Sparks, S.G., Juneja, V.K., McClane, B.A. (2000) Comparative experiments to examine the effects of heating on vegetative cells and spores of Clostridium perfringens isolates carrying plasmid enterotoxin genes versus chromosomal enterotoxin genes. Appl Environ Microbiol. 66: 3234-3240.
Sayeed, S., Uzal, F.A., Fisher, D.J., Saputo, J., Vidal, J.E., Chen, Y., Gupta, P., Rood, J.I., McClane, B.A. (2008) Beta toxin is essential for the intestinal virulence of Clostridium perfringens type C disease isolate CN3685 in a rabbit ileal loop model. Mol Microbiol. 67: 15-30.
Sarker, R., Carman, R.J., McClane, B.A. (1999) Inactivation of the gene (cpe) encoding Clostridium perfringens enterotoxin eliminates the ability of two cpe-positive C-perfringens type A human gastrointestinal disease isolates to affect rabbit ileal loops. Mol Microbiol. 33: 946-958.
Skjelkvale, R., Uemura, T. (1977) Experimental diarrhea in human volunteers following oral-administration of Clostridium perfringens enterotoxin. J Appl Bacteriol. 43: 281-286.
Smedley, J.G., Fisher, D.J., Sayeed, S., Chakrabarti, G., McClane, B.A. (2005) The enteric toxins of Clostridium perfringens. Rev Physiol Biochem Pharmacol. p. 152: 183-204.
Taherian Fard, A., Hasan, F., Bandehpour, M., Mosaffa, N., Mashhadi Abbas, F., Hameed, A., Ali Shah, A., Kazemi, B. (2010) Cloning and expression of C-terminal of Clostridium perfringens type A enterotoxin and its biological activity. Afr J Microbiol Res. 4: 1469-1474.
Thiede, S., Goethe, R., Amtsberg, G. (2001) Prevalence of B2 toxin gene of Clostridium perfringens type A from diarrhoeic dogs. Vet Res. 149: 273-274.
Uzal, F.A.,  Fisher, D.J., Saputo, J., Sayeed, S.,  McClane, B.A., Songer, G., Trinh, H.T., Miyakawa, M.E.F., Gard, S. (2008) Ulcerative enterocolitis in two goats associated with enterotoxin- and beta2 toxin-positive Clostridium perfringens type D. J Vet Diagn Invest. 20: 668-672.
Veshnyakova, A., Protze, J., Rossa, J., Blasig, I.E., Krause, G., Piontek, J. (2010) On the interaction of Clostridium perfringens enterotoxin with claudins toxins. doi: 10.3390/toxins2061336. 2: 1336-1356.
Waters, M., Sovoie, A., Garmory, H.S., Buesched, D., Popoff, M.R., Songer, G., Titball, R.H., MacClane, B.A., Sarker, M.R. (2003) Genotyping and phenotyping of beta 2- toxigenic Clostridium perfringens fecal isolates associated with gastrointestinal diseases in piglets. J Clin Microbiol. 41: 3584-3591.
Wen, Q., McClane, B.A. (2004) Detection of enterotoxigenic Clostridium perfringens type A isolates in American retail foods. Appl Environ Microbiol. 70: 2685-2691.